细胞株

invitrogen 原装脂质体3000操作说明：

从组织中提取总rna 

1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mltrizol加入trizol，转移入离心管进行第2步操作。

2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mltrizol 加入trizol，另外，组织体积不能超过trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。从细胞中提取总rna 。

1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用trizol进行消化、裂解，trizol体积按10cm2/ml比例加入。   

2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。   

2．细胞或组织加trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。  

3．12000rpm 离心5min，弃沉淀。  

4．按200ul氯仿/ml trizol加入氯仿，振荡混匀15分钟，室温放置15min。注：禁用漩涡振荡器，   以免基因组dna断裂。  

5．4℃12000g离心15min。   

6．吸取上层水相，至另一离心管中。  

注：

1）invitrogen 原装脂质体3000千万不要吸取中间界面。   

2)若同时提取dna和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱，若只提rna，则弃下层酚相。 

7．按0.5ml异丙醇/ml trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min。  

8．4℃ 12000g离心10min，弃上清，rna沉于管底。   

9．按1ml 75%乙醇/ml trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。  

10．4℃ 8000g离心5min，尽量弃上清。   

11．室温晾干或真空干燥5-10min。注：rna样品不要过于干燥，否则很难溶解。  

12．可用50ul h2o，te buffer或0.5%sds溶解rna样品，55-60℃5-10min。  注：h2o、te或0.5%sds均须用depc处理并高压。  12、测o.d值定量dna浓度。   

注：

1）此方法提取rna a260/a280值在1.6-1.8之间。 

2) 产率估计：组织标本：（ug rna/mg组织）1-10ug，培养细胞（ug rna/106 cell）：5-15ug。  

注：

1、组织或细胞量过少，可酌情减少trizol用量。

2、组织或细胞用量过多，会引起dna对rna的污染。  

3、高蛋白，脂肪或多糖类组织，肌肉组织或块状植物组织等，组织匀浆或液氮研磨  后须4℃ 1200离心10min去掉不溶物，再进行下面操作，若顶层有脂肪物，则  也须去掉。

4、热天提rna，带手套是必须的，手是rnase的主要来源。  

5、组织块用液氮研磨，效果，若没有液氮或电动匀浆器，可用手动匀浆器代替，此时组织块不宜过大，且需先用眼科剪将组织绞碎，然后再充分研磨。

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