免疫沉淀

GFP-Agarose免疫沉淀试剂盒产品简介：  
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的；纳米抗体由传统抗体的重链可变区（VHH）组成，具有分子量小、亲和力高、特异性强，且耐酸碱高温环境等特点；基于纳米抗体的优点，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象，并且节省实验时间。  
实验步骤：  
提示：尽量在4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。  
1.植物组织裂解处理：  
取适量植物组织样本（叶片等）放置于冷冻液氮中，之后将冷冻后得植物组织样本放于研钵进行研磨，尽可能充分研磨破坏其细胞壁。加入500-1000ul裂解液A或裂解液B（需加入PMSF溶液）进行裂解，为了提高裂解效率，可加入200ul玻璃粉按照600-800g离心力充分震荡30min，裂解完成后12000rpm，离心30min，吸取上清置于新的离心管中，弃去沉淀。（进行第3步）  
2.动物细胞  
2.1收集细胞：  
根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用106-107个细胞。  
2.2裂解细胞：  
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；细胞裂解物4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。  
3.平衡珠子：  
振荡充分混匀珠子，吸取20μlGFP-Nanoab-Agarosebeads到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g离心2分钟，丢弃上清液。  
4.结合蛋白：  
将平衡好的beads加入到细胞裂解产物中，于4℃旋转混合结合30min-1h。  
5.清洗珠子：  
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g离心2分钟，丢弃上清液。用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads，4℃，2,500g条件下离心2分钟，丢弃上清液并重复洗涤3次。  
免疫沉淀  
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