NCM-460NCM-460

细胞名称：NCM-460人正常肠上皮细胞

种属来源：人

组织来源：肠

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：90% DMEM+10% FBS+双抗。

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞培养操作：

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
 

细胞名称：NCM-460人正常肠上皮细胞

种属来源：人

组织来源：肠

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：90% DMEM+10% FBS+双抗。

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞培养操作：

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

细胞名称：NCM-460人正常肠上皮细胞

种属来源：人

组织来源：肠

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：90% DMEM+10% FBS+双抗。

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞培养操作：

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;