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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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HRbio™ miRNA cDNA Synthesis Kit（Stem Loop） HRbio™ miRNA逆转录试剂盒(茎环法） |
HRF0703 |
50 T |
产品描述
miRNA链cDNA合成试剂盒是采用茎环法原理的专用试剂盒， 5×Reaction Mix为一管式反转录预混液，含有反转录所需的所有试剂（反转录酶、RNase Inhibitor、dNTPs、Buffer），只需加入模板RNA和茎环引物即可进行反应，使得cDNA的合成更加的方便快捷。
本试剂盒中使用了具有DNA分解活性的特殊gDNA Remover，不需要中途开盖添加，只需一步操作，即可同时完成基因组清除与逆转录反应，大大的简化了操作步骤，避免了繁杂的加样过程对样品造成的污染和RNA的降解。本试剂盒的反转录酶具有的热稳定性，经过特别优化的缓冲体系，限度保证各种miRNA特异性逆转录产物的合成。同时产物cDNA的兼容性好，可以适配市面上主流的荧光定量mix做下游检测试验。
miRNA逆转录试剂盒(茎环法）
产品组分
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组分 |
HRF0703 |
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5×Reaction mix |
200 μL |
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gDNA Remover |
50 μL |
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RNase free H20 |
1.5 mL |
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）尽量避免RNase对样品的污染；
2）为保证逆转录的成功，请尽量获得高质量的RNA样品；
3）5×Reaction mix和gDNA Remover含有甘油，比较粘稠，溶液易挂壁和吸附在移液枪头外导致产品损耗，因此，在使用前请点甩离心后使用，同时使用低吸附移液枪头；
4）5×Reaction mix和gDNA Remover所包含的酶均足够量。即使每次5×Reaction mix只用3.6μl或0.8μL的gDNA Remover都不会对使用效果造成影响。
5）本产品仅作科研用途！
使用方法
一、茎环法miRNA链cDNA合成(以20 μl反应体系为例，可使用10μL体系)
1.使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2.在无RNase管里面加入以下成分：(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
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组分 |
体积 |
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Total miRNA |
≤2μg* |
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Stem-loop primer(2μM) |
1μL |
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5×Reaction mix |
4μL |
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gDNA Remover |
1μL |
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RNase free H20 |
补足到20μL |
* 在反应中使用的total miRNA 必须包含有小分子RNA(miRNA)。此过程也可以使用富集的miRNA， 单miRNA无法直接用分光光度计定量，建议直接加入2μl ~5μl。可根据目的miRNA丰度决定加入量，但是对于低丰miRNA 样品而言(如血清血浆提取物)，可直接加入体积8 μl。
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